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分析薄层层析的操作步骤

点击次数:   更新时间:16/05/14 09:50:05     来源:www.xinnuoguijiao.com关闭分    享:
  1、点样:
  ⑴ 样品的溶解:将样品溶于展开剂极性相近、挥发性高的有机溶剂。
  ⑵ 薄层点样:用毛细管(0.5mm以下)或用专业点样器进行点样。
  点样的要求:样点位置应在距离底边1-1.5cm处;点样量适当;样点直径小于2-3mm;间隔反复点样;多个样点时,间隔为2cm且处于同一条直线上。
  经验做法:可先在PC或TLC点上不同量的样品,并展开、显色后观察分离情况,以此确定最佳样品用量。
  2、展开:当样点上的溶剂充分挥干后,将薄层放置在密闭容器中,使适当的展开剂从薄层的一端向另一端进行浸润展开的过程。
  要求:密闭容器可选用层析缸、标本缸、标本筒等;展开方式有上行法、下行法之分,展开方向有单向、双向、多次展开等。
  注意事项:先悬空饱和、再入液展开;样点不能泡在展开剂中;薄层浸入时不能歪斜进入。
  3、显色:用适当的方法或者适当的显色剂处理薄层,使其上可能已经分离的各成分斑点显示出来,以方便计算各个斑点的比移值,从而提供定性与定量的依据。
  显色的基本步骤是:一看、二照、三碘、四显,荧光背景也常见。
  4、比移值的计算与定性、定量:展开结束后,经过各种显色操作后,样品中各个成分的斑点可能出现了不同程度的分离,为了表达各成分的相对位置(极性)通常以比移值作为称量斑点位置的指标。
  注意事项:薄层层析的Rf值受多种因素影响,即使严格按照实验要求做了,结果的重现性仍较差。因此,薄层定性时常与标准品一起点样进行对比分析。

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